《表1 实时荧光定量PCR所用引物》

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《绵羊CCCH型锌指蛋白基因ZC3H10的mRNA表达研究》

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根据TaKaRa公司PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time）试剂盒说明书合成cDNA第一链。荧光定量PCR仪为Applied Biosystems公司的7500 Fast RealTime PCR System，荧光定量PCR试剂盒为TaKaRa公司的SYBR Premix Ex TaqⅡkit。反应体系：SYBR Premix Ex TaqⅡ（2×）10.0μL，PCR正反向引物各0.8μL，Rox Reference DyeⅡ0.4μL，cDNA模板2.0μL，去RNA酶超纯水6.0μL。反应程序：预变性95℃30 s；95℃5 s和60℃34 s，45个循环；熔解曲线阶段为95℃15 s，60℃1 min，再以每10 s 0.5℃的速率从60℃上升到95℃。每个样品进行3次技术重复。RPL13A由于表达稳定而作为内参基因。特异性引物通过在线工具Primer-BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）设计而成，引物序列见表1。基因的mRNA相对表达量由2-ΔΔCT方法计算得出。