《表1 TaPINs实时荧光定量PCR分析所用引物》

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《小麦PIN基因家族的鉴定及表达分析》


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从Wheat Expression Browser(powered by expVIP)[31-32]下载小麦品种中国春在不同时期不同组织的转录组表达数据,用于分析小麦PIN基因的表达模式,采用实时荧光定量PCR对小麦PIN基因的表达进行鉴定。使用Omega biotek公司植物RNA提取试剂盒(R6827)提取开花后30 d的小麦籽粒RNA,并反转录成cDNA。根据小麦PIN基因序列,利用Oligo 7软件设计定量PCR引物(表1),由上海生工生物工程有限公司合成。实时荧光定量PCR反应体系(20μL)包括10μL SYBR?Green Realtime PCR Master Mix、1μL primer#1(10μmol·L-1)、1μL primer#2(10μmol·L-1)、1μL Template DNA和4μL PCR grade water。反应程序为95℃2 min;95℃15 s,54℃30 s(同时收集信号值),40个循环,溶解曲线分析为54℃—95℃。使用β-Actin作为相对定量的内参基因,采用2-ΔΔCt方法进行数据计算,基因的相对表达量使用(平均值±标准差)表示。