《表1 本研究所用的引物序列》

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《鼠伤寒沙门氏菌双组分系统arcB基因缺失株的构建及药物敏感性分析》


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注:带下划线的碱基是同源臂或限制性酶切位点,小写字母是点突变位点。

根据Gen Bank登录的鼠伤寒沙门氏菌arc B基因序列(SL1344_RS17190),利用Primer 5.0软件设计特异性鉴定引物、arc B基因敲除引物、回复引物以及点突变引物。其中arc B-F/arc B-R为鉴定引物,用于鉴定arc B基因缺失株;arc B-H1P1/arc B-H2P2为敲除引物(H1、H2代表arc B基因上下游各45 bp的同源臂;P1、P2代表kan+基因通用引物)用于扩增含arc B基因同源臂的kan+基因片段;引物k2/kt用于检测插入的kan+基因;引物arc B-F/kt和k2/arc B-R用于检测kan+基因插入的位置。利用Primer 5.0软件筛选arc B基因中不含且切割效率高的限制性内切酶,设计回复株引物arc B-Eco R I-F/arc B-Bam H I-R。引物均由西安擎科泽西生物科技有限责任公司合成,引物序列见表1。