《表1 本研究所用的引物及序列》

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《RBSDV P7-2基因重组AcMNPV的构建及其对sf9细胞的致死作用》

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注:下划线为酶切位点；斜体加粗部分为Flag-tag，通过PCR添加到P7-2基因的C端。Note:Underlined indicates restriction sites.Bold italic part indicates the Flag-tag which is added to C-terminal of the P7-2 gene by PCR.

在pFPBG中，ph基因后连接有SV40终止子，用以终止ph基因的转录。以pFBPG质粒为模板，使用引物ph-F和SV40-R（表1），PCR扩增长1 015 bp的ph SV40片段，使用SV40终止子终止ph基因的转录。将ph SV40片段连入pGEM-T Easy载体，StuⅠ、SpeⅠ双酶切鉴定并测序。将测序正确的ph SV40片段连入p FastBac-HTB载体，StuⅠ、SpeⅠ双酶切鉴定，构建形成HTB-ph SV40。以pFBPG质粒为模板，使用引物ie-1-F和ie-1-R（表1），PCR扩增得到长567 bp的AcMNPV ie-1启动子，连入pGEM-T Easy载体，SpeⅠ、XbaⅠ双酶切鉴定并测序。将测序正确的ie-1启动子连入HTB-ph SV40载体，SpeⅠ、XbaⅠ及StuⅠ、XbaⅠ双酶切鉴定，构建形成HTB-ph SV40-ie-1。以pBIN为模板，以Flag-P7-2-F和P7-2-R（表1）为引物，通过PCR将Flag标签序列添加到P7-2基因的C端，并得到长954 bp的Flag P7-2片段，将其连入pGEM-T Easy载体，XbaⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定并测序。将测序正确的Flag P7-2片段连入HTB-ph SV40-ie-1，经XbaⅠ、XhoⅠ及StuⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定，最终构建形成供体质粒HTB-ph SV40-ie-1-Flag P7-2（图1）。