《表2 本研究所用的引物及序列》

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《乳酸乳球菌硫胺素转运蛋白ThiT提高酸耐受性的机制》

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注：下划部分代表酶切位点。

p NZ8148/thi T的构建过程如图1所示。首先以乳酸乳球菌（L.lactis NZ9000）的基因组DNA为模板，以p NZ8148/thi T-F和p NZ8148/thi T-R为引物，通过PCR扩增并胶回收得到片段thi T；然后将表达质粒p NZ8148和片段用Nco I和Xba I双酶切，酶切产物纯化后用T4DNA连接酶连接6～8 h；连接产物转化E.coli MC1061，最后用引物p NZ8148-F和p NZ8148-R进行菌落PCR验证，并挑取条带大小约800 bp的克隆子进行测序验证，得到质粒p NZ8148/thi T。所用引物序列见表2。将空质粒p NZ8148和重组质粒p NZ8148/thi T电转化进入L.lactis NZ9000，通过氯霉素抗性的平板筛选获得对照菌株L.lactis(Vector）和重组菌株L.lactis(Thi T）。