《表1 本研究所用各种引物及序列》

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《利用CRISPR/Cas9技术编辑水稻香味基因Badh2》

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经过验证的质粒载体转化到农杆菌感受态细胞EHA105中，浸染并转化嘉58与秀水134愈伤组织，通过潮霉素筛选获得转基因再生植株。水稻叶片基因组DNA由CTAB法提取，利用Hpt引物（Hpt-F与Hpt-R，表1）和Cas9引物（Cas9-F与Cas9-R）通过PCR鉴定阳性转基因植株。PCR反应体系（20μL）为2.0×PCR Buffer 10μL、上下游引物各0.5μL、DNA 2μL和H2O 7μL。PCR反应程序为95℃3min；95℃30 s，60℃30 s，72℃30 s，35个循环；72℃5min。PCR反应产物于1.5%琼脂糖凝胶电泳后于紫外灯下拍照。根据阳性转基因植株靶点特性，分别以exon2和exon7的引物，利用高保真KOD Fx酶扩增靶点相邻序列。PCR反应体系（20μL）为2.0×Kod Fx buffer 10μL、dNTP（2 mmol·L-1）2μL、引物各0.5μL、Kod Fx 0.5μL、DNA 2μL和H2O 4.5μL。PCR反应程序为95℃3min；95℃30 s，60℃30 s，68℃30 s，35个循环；68℃5 min。PCR反应产物于1.5%琼脂糖凝胶电泳，割胶回收后测序，根据测序结果分析转基因T0代植株靶点的突变类型。