《表2 本研究所用引物序列》

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《脊尾白虾肌球蛋白重链和肌球蛋白轻链基因的克隆与表达分析》

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通过Trizol法提取脊尾白虾各组织的总RNA，利用紫外分光光度计与琼脂糖凝胶电泳等方式对提取的总RNA质量进行检测。选择质量及完整性较好的肌肉组织的总RNA，使用SMARTTMRACEcDNA Amplification Kit分别合成3’和5’RACE的cDNA第一链。从脊尾白虾转录组文库中获得EcMHC2、EcM-LC1基因部分EST序列，利用PrimerPremier 6.0软件设计中间片段引物验证其准确性后，设计3’和5’RACE特异性引物（见表2）。3’和5’RACE引物分别与UPM配对进行cDNA的3’和5’末端扩增。参照核酸凝胶回收试剂盒说明书，经1.5%琼脂糖凝胶电泳后通过切胶回收得到扩增目的片段，将目的片段与pEASY-T1载体连接，然后转入到感受态细胞TransT1中，过夜培养后，通过蓝白斑筛选挑出阳性单克隆，经PCR检测合格后送测序。