《表1 本研究所用引物序列》

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《TIG-Fc真核表达载体的构建及其对自然杀伤细胞功能的影响》

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分别以TIGIT全长基因序列和含人IgG3 Fc段的质粒为模板，利用Primer 5.0软件，设计TIGIT胞外段引物TIG-F和TIG-R，从TIGIT全长基因中扩增TIGIT的胞外段（TIG）；设计Fc段引物Fc-F和Fc-R，从含人IgG3 Fc段的质粒中扩增Fc片段。PCR反应体系为:DNA模板1μL，正、反向引物各0.5μL，Taq酶0.3μL，dNTP 2μL，10×buffer 2.5μL，去离子水补至25μL。反应程序为:95℃预变性10 min；94℃30 s，63℃30 s，72℃45 s，共35个循环；72℃延伸10 min。引物Fc-F在合成过程中加入一段连接肽（linker）DNA序列，便于通过PCR搭桥方式和Fc基因融合，从而实现2个片段间的重叠延伸过程（引物及linker序列见表1）。然后分别将PCR产物中的人TIG和Ig G3 Fc片段回收，以TIG-F和Fc-R为引物进行重叠PCR，扩增获得TIG-Fc融合基因。扩增体系为:模板各1μL，10×buffer 2.5μL，Taq酶0.3μL，dNTP 2μL，引物TIG-F和Fc-R各0.5μL，去离子水补至25μL。扩增程序为:95℃预变性10 min；94℃45 s，64℃45 s，72℃45 s，共35个循环；72℃延伸10 min。