《表1 本研究所用引物序列》

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《信号分子AI-2的体外合成及其对副溶血性弧菌四环素耐药性的调控作用》

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（2）四环素亚抑菌浓度下AI-2对副溶血性弧菌耐药基因转录水平的影响：将副溶血性弧菌菌株接种到LBS液体培养基中，36°C、150 r/min振荡培养过夜，将菌液浓度稀释至约105-106 CFU/mL。1 mL体系中加入亚抑菌浓度的四环素（Vp2009027、Vp2011007、Vp2015094对应浓度分别为30、60、60μg/mL）、副溶血性弧菌稀释液和10%（体积比）终浓度分别为6、15和30μmol/L的AI-2，以10 mmol/L的磷酸钠缓冲液（pH 7.5）作为对照，36°C静置培养12 h和24 h。培养液采用细菌总RNA提取试剂盒提取副溶血性弧菌的RNA，采用PrimeScriptTM RT Reagent Kit with gDNA Eraser试剂盒进行逆转录获得cDNA，以副溶血性弧菌16S rRNA基因为内参基因，采用TB GreenTM Premix ExTaqTMⅡ试剂盒进行实时荧光定量PCR，检测副溶血性弧菌四环素耐药基因tetB和tetM的转录水平。荧光定量PCR反应体系（20μL）:2×预混液10μL，正、反向引物（10μmol/L）各0.8μL，c DNA 50 ng，无菌水补足20μL。荧光定量PCR反应条件：95°C 30 s；95°C 5 s，60°C 30 s，40个循环；溶解曲线反应条件为95°C 5 s，60°C 60 s。所用引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列见表1。