《表1 本研究中所用的引物序列》

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《谷氨酸棒杆菌一步法发酵糖质原料生产γ-聚谷氨酸》

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以B.subtilis ATCC 6051-U的基因组为模板，分别以pgs B-NdeⅠF/pgs B-Bam HⅠ-R、pgs C-NdeⅠ-F/pgs C-Bam HⅠ-R、pgs A-NdeⅠ-F/pgs A-Bam HⅠ-R为引物（序列见表1），PCR扩增出带酶切位点的目的基因pgsB、pgsC、pgsA片段。将酶切的目的基因pgsB片段与双酶切（NdeⅠ、Bam HⅠ）线性化的载体pZM1用T4 DNA连接酶进行过夜连接，并转化到大肠杆菌JM109感受态细胞中，在含有25 mg/L的卡那霉素（Kan）LB-Glu抗性平板上进行筛选，获得的转化子经菌落PCR验证及酶切验证，得到正确的转化子，再用同样的方法将pgsC、pgsA分别连接到载体pZM1中。