《表1 本研究中所用引物序列》

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《一种基于lacZ基因和pUC复制子的原核启动子报告系统的构建及评价》

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为便于后续实验设计，需将lac Z基因中的ClaⅠ、SacⅠ、NdeⅠ酶切位点消除。为此，基于同义密码子原理并根据已知lac Z基因设计定点突变引物，其中lac Z-M1-F/lac Z-M1-R、lac Z-M2-F/lac Z-M2-R、lac Z-M3-F/lac Z-M3-R反向互补，可对ClaⅠ、SacⅠ、NdeⅠ识别序列第3位碱基分别实现C→T、G→A、T→C的定点突变。lac Z-F1及lac Z-R为针对lac Z基因两端的扩增引物，引物lac Z-F2和lac Z-F3则为在lac Z-F1引物基础上依次引入所需序列和酶切位点（表1）。设计用于置换质粒中紧邻lac Z基因上游启动子的多克隆位点序列时，利用启动子分析预测数据库（www.softberry.com）进行分析，以确保序列中不含有潜在的启动子元件。所有引物均由英潍捷基（上海）贸易有限公司合成。