《表1 RT-PCR扩增及测序所需引物》

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《A型塞尼卡病毒的分离鉴定及生物学特性研究》

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注:引物序列和位置参考株A型塞尼卡病毒（SVA）SVV-001序列（GenBank登录号:NC_011349）和FMDV O/BY/CHA/2010株序列（Gen-Bank登录号:JN998085.1）。Notes:Primer sequence and the position reference of SVA SVV-001strain sequence（GenBank accession number:NC_011349）an

参照A型塞尼卡病毒（SVA）SVV-001株序列（GenBank登录号:NC_011349）和口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus，FMDV）O/BY/CHA/2010株序列（GenBank登录号JN998085.1）设计引物（表1），由擎科泽西生物技术有限公司合成。以总RNA为模板进行反转录，反应体系为5×PrimeScript RT Master Mix 2μl，RNA模板1μl，添加RNase free水至总体积为10μl。PCR反应体系是5×Buffer 10μl，dNTP 4μl，上下游引物各2μl，反转录产物3μl，PrimeSTAR HS DNA Polymerase1μl，加无菌蒸馏水至总体积50μl。PCR扩增程序为:94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火30s；72℃延伸1min，32个循环；72℃延伸10min。取8μl PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像系统拍照观察。将阳性PCR产物送擎科泽西生物技术有限公司进行测序。