《表1 扩增APV引物：杏衰退萎黄病病毒的siRNA高通量测序和RT-PCR鉴定》

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《杏衰退萎黄病病毒的siRNA高通量测序和RT-PCR鉴定》

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根据siRNA拼接获得的APV1～APV3 contigs序列设计3对引物（表1），分别用于扩增APV1、APV2和APV3的全长CP基因。以cDNA为模板进行PCR扩增，PCR反应体系25μL，含10×PCR Buffer 2.5μL，2.5mmol·L-1 dNTPs 2.0μL，10 mmol·L-1上、下游引物各1μL，5 U·mL-1 Taq酶0.5μL，cDNA 2.0μL，ddH2O补平至25μL。PCR扩增程序为：94℃预变性4 min；94℃变性30 s，64℃退火30 s，72℃延伸45 s，35个循环；72℃保持10 min。反应结束后取PCR产物5μL，用1%琼脂糖凝胶电泳分离检测，凝胶成像系统成像。