《表1 荧光实时定量PCR所使用引物及扩增效率》

《表1 荧光实时定量PCR所使用引物及扩增效率》图表

《表1 荧光实时定量PCR所使用引物及扩增效率》
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pH对产叶酸植物乳杆菌叶酸产量及相关基因表达的影响中,取L.plantarum 4_3菌株在12、24、36和48 h时间点的发酵液进行RNA提取,使用UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒(上海生工生物工程有限公司),后使用反转录试剂盒Hi Script II Q RT SuperMix for qPCR(南京诺唯赞生物科技有限公司)进行反转录,最后进行荧光实时定量PCR(Quantitative PCR,qPCR)测定植物乳杆菌YM 4-3叶酸合成相关基因表达情况。qPCR所使用的引物利用Primer Premier 5软件设计,具体序列信息见表1。使用ChamQTM SYBR Qpcr Master Mix(南京诺唯赞生物科技有限公司)对反转录后的产物进行扩增,以16S rRNA基因为内参,每个样品做3个重复试验,经过梯度PCR测试。虽然每对引物Tm值不完全一样,但是在60℃的退火温度条件下均能达到较好的扩增效率,因此扩增程序统一为95℃预变性30 s,95℃10s,60℃30 s,72℃30 s,扩增40个循环后置于4℃保存。qPCR的结果用2-ΔΔCt代表相对表达量,以MRS培养基中12 h样品各个基因表达量做对照。

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