《表1 荧光实时定量PCR所使用引物及扩增效率》

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《pH对产叶酸植物乳杆菌叶酸产量及相关基因表达的影响》

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取L.plantarum 4＿3菌株在12、24、36和48 h时间点的发酵液进行RNA提取，使用UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒（上海生工生物工程有限公司），后使用反转录试剂盒Hi Script II Q RT SuperMix for qPCR（南京诺唯赞生物科技有限公司）进行反转录，最后进行荧光实时定量PCR(Quantitative PCR，qPCR）测定植物乳杆菌YM 4-3叶酸合成相关基因表达情况。qPCR所使用的引物利用Primer Premier 5软件设计，具体序列信息见表1。使用ChamQTM SYBR Qpcr Master Mix（南京诺唯赞生物科技有限公司）对反转录后的产物进行扩增，以16S rRNA基因为内参，每个样品做3个重复试验，经过梯度PCR测试。虽然每对引物Tm值不完全一样，但是在60℃的退火温度条件下均能达到较好的扩增效率，因此扩增程序统一为95℃预变性30 s，95℃10s，60℃30 s，72℃30 s，扩增40个循环后置于4℃保存。qPCR的结果用2-ΔΔCt代表相对表达量，以MRS培养基中12 h样品各个基因表达量做对照。