《表1 实时荧光定量PCR法扩增引物》

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《维氏气单胞菌灭活疫苗对草鱼免疫相关基因表达的影响及其保护效果》

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采用实时荧光定量PCR法。根据GenBank中登录的草鱼18SrRNA（EU047719）、IgM（DQ417927）、C3（AY374472）、IL-1β（KX09493）、C-凝集素（HM452139）和溶菌酶（EU83565）基因序列，利用Primer Premier 5.0软件设计引物。引物序列见表1，引物由吉格生物科技有限公司合成。于免疫后2、4、7、11、14和21 d分别取各组草鱼脾脏、头肾、鳃组织，每组每次分别随机取3尾。采用Trizol Reagent提取组织RNA，反转录为cDNA，以其为模板进行实时荧光定量PCR扩增，每个样品设3个平行。PCR扩增条件为:95℃30 s（1个循环）；95℃5 s，60℃34 s（40个循环）；95℃15 s，60℃60 s，95℃15 s（1个循环）。同时以18S rRNA为内参，参照文献[4]方法构建标准曲线。