《表1 实时荧光定量PCR扩增引物名称及其序列》

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《七彩神仙鱼脑组织转录组mRNAs差异表达分析》

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为了验证测序筛选结果的准确性和可靠性，采用实时荧光定量PCR随机在m RNAs转录组中选择6个差异表达基因进行验证。扩增引物（表1）采用Primer 5.0进行设计，并委托南京建成科技有限公司合成。实时荧光定量PCR扩增程序：95℃预变性2 min；95℃10 s；60℃20 s；进行40个循环；72℃延伸60 s。经SYBR通道检测荧光信号，发现18S r RNA在七彩神仙鱼雌、雄鱼脑组织中无差别且稳定表达，因此将其作为本研究的管家基因。管家基因和目的基因的扩增效率相同，采用2-ΔΔCt法换算目的基因相对表达量。