《表1 实时荧光定量反转录PCR扩增目的基因的引物序列》

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《盐胁迫培养下季也蒙毕赤酵母的转录组学差异分析》

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cDNA模板合成步骤参照去基因组DNA PrimeScriptTM反转录试剂盒[RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time）]说明书，用无菌水对反转录样品进行梯度（2、4、6、8、10倍）稀释，并以稀释后的cDNA为模板进行qPCR反应（每个浓度设置3个重复），选取CT值在15～25间的cDNA的合适稀释倍数进行后续试验，整个试验重复2次及以上，直至2次试验结果一致，RT-qPCR试验详细步骤参照TB GreenTMPremix Ex TaqTM试剂盒说明书。两步法PCR扩增反应条件如下：95℃预变性30 s；95℃变性5 s，60℃复性30 s，40个循环。溶解曲线条件如下：95℃变性15 s，以0.3℃为步阶从60℃升温至95℃，95℃保温15 s。利用一步法实时荧光定量PCR仪（美国Thermo Fisher科技公司）检测反应体系荧光变化，相对定量计算采用2-△△CT方法[13]。目的基因的引物设计和合成均由生工生物工程（上海）有限公司完成，引物序列如表1所示。