《表1 实时荧光定量PCR扩增引物序列》

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《急性低氧胁迫对翘嘴鳜抗氧化酶、呼吸相关酶活性及相关基因表达的影响》

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取0.1 g翘嘴鳜肝脏置于RNAiso Plus[宝生物工程（大连）有限公司]中匀浆，按说明提取总RNA。以微量紫外分光光度计和1.5%琼脂糖凝胶电泳分别检测总RNA纯度及完整性后，使用HiFiScript cDNA Synthesis Kit试剂盒（北京康为世纪生物科技有限公司）将其反转录合成cDNA，-20℃保存备用。在NCBI中检索HIF-1α（Hypoxia inducible factor-1alpha）、EPO(Erythropoietin）和HSP90α（Heat shock protein 90 alpha）基因序列，以β-actin为管家基因，利用Primer-BLAST程序设计引物（表1），委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。实时荧光定量PCR反应体系20.0μL:2×UltraSYBR Mixture 10.0μL，上、下游引物各0.4μL，cDNA模板0.8μL，ddH2O 8.4μL。扩增程序：95℃预变性10 min；95℃10 s，60℃30 s，72℃32 s，进行39个循环；60℃30 s，95℃15 s。以2-ΔΔCt法换算目的基因的相对表达量。