《表2 实时荧光定量反转录PCR引物序列》

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《腺相关病毒介导shRNA敲减小鼠海马兴奋性氨基酸转运体3动物模型的构建》

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HT-22细胞经0.25%胰酶消化后重悬，取适量接种至24孔板中，37℃孵箱中过夜；将细胞随机分为6组，每组n=3，分别为Baseline组、NC组、mSLC1A1-1组、mSLC1A1-2组、mSLC1A1-3组、mSLC1A1-4组，其中Baseline组作为校准样品；分别取5种病毒液按1∶10与培养基混合稀释。吸去24孔板中原培养基，Baseline组换入新鲜培养基1 ml，NC组、mSLC1A1-1组、mSLC1A1-2组、mSLC1A1-3组、mSLC1A1-4组分别换入rAAV-shRNA-NC-EGFP、rAAV-shRNA-SLC1A1-1-EGFP、rAAV-shRNA-SLC1A1-2-EGFP、rAAV-shRNA-SLC1A1-3-EGFP、rAAV-shRNA-SLC1A1-4-EGFP病毒梯度稀释液1 ml，37℃孵箱中孵育。24 h后吸去病毒稀释液，换入1 ml新鲜培养基；48 h后于荧光倒置显微镜下观察并记录结果；72 h后将各组细胞用PBS漂洗2次后，消化细胞并离心，弃上清。Trizol法提取总RNA，紫外分光光度计测定相对纯度和浓度，用反转录试剂盒（TaKaRa DRR047A）除gDNA后反转录，生成cDNA。利用SYBR试剂盒（TaKaRa DRR081A），以GAPDH作为内参基因，cDNA为模板进行Real-time PCR反应，反应体系25μl（表2）。条件:95℃30 s变性；95℃10 s，62℃30 s，72℃30 s，40个循环；65℃每5 s升高0.5℃至95℃15 s。测得扩增及熔解曲线，2-ΔΔCt法分析SLC1A1基因mRNA的相对表达情况。