《表2 实时荧光定量PCR引物序列》

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《低钙磷饲粮添加高剂量植酸酶对1～21日龄黄羽肉鸡生长性能、胫骨性能、血清生化指标的影响》

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称取肾脏样品80 mg，加入1 mL Trizol试剂（TaKaRa，日本）提取总RNA。按照反转录试剂盒（TaKaRa，日本）说明书将提取的RNA（1μg）反转录为cDNA。根据GenBank中鸡的基因序列，使用Primer premier 3.0软件设计引物（表2）。实时荧光定量PCR反应体系（20μL）:2μL cDNA，10μL SYBR Green 2×M ix，上、下游引物各1μL（100 nmol/L）工作液，6μL的ddH2O。体系反应条件:95℃预变性3 min；95℃变性15 s，退火30 s，72℃延伸30 s，40个循环。以表达稳定的β-肌动蛋白（β-actin）作为实时荧光定量PCR的内参基因。基因表达量采用2-ΔΔCt法计算。