《表2 实时荧光定量PCR引物序列》

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《磷脂对日本沼虾虾青素沉积和利用的影响》

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取-80℃保存的肝胰腺组织样品于液氮中研磨，参照Trizol使用说明书进行总RNA提取。用DNaseⅠ对RNA进行消化处理，所得RNA经紫外分光光度计检测浓度，1%琼脂糖凝胶电泳检测后，按照PrimeScriptTMRT 1st strand cDNA Synthesis Kit试剂盒说明书合成cDNA的第1链，-20℃保存备用。参考原居林[14]克隆目的基因SOD，设计特异引物（表2）。以无菌水作为阴性对照，以β-肌动蛋白（β-actin）为参比基因。20μL反应体系为:稀释的cDNA样本2μL、灭菌蒸馏水6μL，SYBR Premix Ex Taq 10μL，8μmol/L的上、下游引物各1μL。分析仪器为Line Gene 9600荧光定量PCR仪。反应程序为:95℃预变性20 s；95℃15 s，60℃2 s，共40个循环；熔解段95℃15 s、60℃60 s、95℃15 s。每次反应都通过从95℃降至60℃（4℃/s）绘出熔解曲线。试验结果用2-ΔΔCt方法[15]分析。