《表2 实时荧光定量PCR引物序列》

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《3D打印聚乳酸树脂肱骨结合生物活性涂层促进成骨细胞的黏附及抗菌能力》

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黏附斑蛋白和细胞护骨素基因表达的测定：培养6 d后，用胰酶消化并收集各组件培养的细胞，抽提总RNA，反转录为cDNA，总RNA抽提采用Trizol法抽提，反转录方法参见Thermo厂家说明书，使用SYBR Premix Ex tagII试剂通过7500 Fast实时荧光定量PCR仪分析黏附斑蛋白和护骨素及内参基因GAPDH的转录水平，各基因NCBI登录号、引物序列及PCR扩增长度见表2。目的基因的mRNA水平值均通过内参基因GAPDH进行标准处理后再做比较，PCR反应条件如下：95℃预变性30 s，95℃变性10 s，60℃退火30 s，扩增40个循环，采用2-??Ct计算基因拷贝数倍数变化。