《表2 实时荧光定量PCR引物序列》

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根据GenBank上牛HSP70 mRNA的基因序列，用Primer 5.0设计引物，引物序列见表2，引物由生工生物上海有限公司合成。采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术对HSP70的基因表达进行定量，反应体系为25μL:SYBR Premix12.5μL，上游引物1.0μL，下游引物1.0μL，c DNA 2.0μL，dd H2O 8.5μL。扩增条件为:95℃变性15 s，57℃退火1 min，共40个循环，PCR后利用熔解曲线判断扩增的正确性和特异性。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）为内参基因，读取样品Ct值，采用ΔΔCt法计算HSP70 mRNA表达量。