《表2 实时荧光定量PCR引物序列》

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《小肽对大黄鱼仔鱼生长和小肠发育的影响及其在低温胁迫下的抗氧化应激效应》

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按照Zeng等[19]的方法分析肝脏样本的基因表达。首先，使用Trizol（Invitrogen）试剂盒提取肝脏总RNA，通过琼脂糖凝胶（1%）电泳法检测提取的总RNA的完整性，采用超微量分光光度计（Thermo Scientific）测定样品吸光度值（260和280 nm）来检测总RNA的浓度和质量，然后将样本保存于-80℃超低温冰箱备用。以总RNA为模板，使用RevertAidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit(Fermentas）合成第1链cDNA。依据大黄鱼基因组数据库中的基因序列设计RT-qPCR引物（表2）[20]。使用2×QuantiFast SYBR Green Master Mix试剂盒（Qiagen），以β-肌动蛋白（β-actin）为内参基因，在Applied Biosystems Prism 7500 Sequence Detection System上进行PCR。每个反应设2个平行。PCR反应体系如下：SYBRPremix Ex Taq Master Mix（TaKaRa）10μL，cDNA稀释液2.0μL，上游和下游引物各0.1μmol/L，加双蒸水（ddH2O）至20μL。PCR反应程序如下：95℃，1 min；95℃，5 s，57℃，10 s，45个循环；72℃，30 s。按照2-ΔΔCt方法计算目的基因表达水平。