《表1 实时荧光定量PCR引物序列及扩增产物长度》

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《热应激致大鼠睾丸中热休克蛋白A2及几种热休克转录因子的表达变化研究》

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HSPA2、HSF1、HSF2、HSF5、HSFY及HPRT（内参）基因引物序列如表1所示，所有引物均由擎科新业生物技术有限公司合成。将取材于热应激组和对照组大鼠的睾丸组织全部自-80℃取出，各称取约20毫克，使用RNAprep Pure Tissue Kit法提取大鼠睾丸组织总RNA，经Goldenstar RT6 c DNA Synthesis Kit Ver.2法逆转录得到各自的c DNA，最后使用表1所示引物，根据2×TSINGKE Master q PCR Mix (SYBR Green I）法进行实时荧光定量PCR（反应体系10μl，反应条件：95℃预变性3分钟；95℃10秒，57℃10秒，72℃30秒，共40个循环）。PCR反应结束后，对熔解曲线及其变化率曲线进行分析，观察是否存在非特异性扩增。根据反应所得Ct值，以HPRT为内参，按照2-ΔΔCt法计算目的基因m RNA相对表达量。