《表1 实时定量RT-PCR引物序列及产物长度》

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《心理应激诱导ROS产生在食管上皮细胞间隙增宽发生中的作用机制》

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采用实时定量RT-PCR方法检测Nox-4、Nrf-2、HO-1、闭合蛋白-1（Claudin-1）、闭合蛋白-4（Claudin-4）、咬合蛋白（Occludin）及胞质紧密黏连蛋白-1（zonula occludens，ZO-1）mRNA的表达。取每只小鼠食管组织20mg，采用TRIzol试剂提取总RNA，采用天根公司Fast Quant RT试剂盒合成第一链cDNA。由上海生工生物工程股份有限公司设计并合成引物，各指标及β-肌动蛋白（actin）引物序列和扩增产物长度见表1。RT-PCR反应严格按照试剂盒操作说明进行。实时定量RT-PCR，反应体系为20μl，反应条件为94℃3min，然后95℃20s，60℃20s，72℃20s，共40循环。反应结束后由电脑自动得出荧光曲线及CT值，采用2—△△Ct计算出Stress组小鼠食管组织相对于Control组中目标基因的相对表达倍数。