《表1 实时荧光定量RT-PCR引物序列》

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《刚毛柽柳ThZFP1基因的克隆和表达分析》

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采用植物RNA提取试剂盒（Bioteke）分别提取刚毛柽柳叶组织和根组织总RNA。获得的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳检测其质量，并用核酸浓度测定仪测定其纯度和浓度。分别取1μg总RNA进行反转录，反转录反应体系和操作参照PrimerScript RT reagent Kit（Perfect Real Time）（TaKaRa）说明书。将反转录产物cDNA稀释10倍，用作实时荧光定量PCR反应模板。选择作为内参基因的是β-actin（FJ618517）、α-tubulin（FJ618518）和β-tubulin（FJ618519）。内参和Th ZFP1基因的引物序列见表1。实时荧光定量PCR反应体系:2×TransStart Top Green qPCR SuperMix 10μL、上游引物和下游引物（10μmol·L-1）各1μL、稀释后的模板cDNA 2μL，加灭菌去离子水补足体积至20μL。反应程序为:94°C预变性30 s；94°C变性12 s，58°C退火30 s，72°C延伸45 s，79°C读板1 s，45个循环。每个样品3次重复，反应在MJ Opticon 2仪器（BioRad Hercules，CA，USA）上完成。利用2-??Ct方法对基因的相对表达量进行分析（Livak和Schmittgen 2001）。