《表1 引物信息：小麦F-box/LRR类基因TaFBL14的抗逆相关表达模式及互作蛋白鉴定》

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《小麦F-box/LRR类基因TaFBL14的抗逆相关表达模式及互作蛋白鉴定》

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以实验室前期构建的克隆载体pGEM T-easyTaFBL14为模板，用分别带有Nco I和Bam HI酶切位点的引物（序列见表1）进行扩增，将酶切位点引入到TaFBL14开放阅读框（open reading frame，ORF）的两侧。扩增程序为:94°C预变性3 min；然后94°C变性30 s，60°C退火30 s，72°C延伸1 min，33个循环；最后72°C延伸10 min。采用酶切连接法将Ta FBL14基因ORF插入DNA结合结构域（binding domain，BD）中，构建诱饵载体pGBKT7-TaFBL14（BD-TaF-BL14）并测序验证。构建成功的诱饵载体转化至酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C.Hansen）菌株Y187。含有诱饵载体的Y187与非亲和叶锈菌（Puccinia triticina Erikss.）05-19-43（2）侵染的小麦Tc Lr15叶片的酵母cDNA文库（前期已构建）进行交配，根据Y2H的原理筛选同时含有诱饵和猎物的菌株，阳性克隆委托北京中科希林生物科技有限责任公司进行序列测定，通过BLAST（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）比对确认与TaFBL14互作的靶蛋白。