《表1 PCR引物序列：梭梭14-3-3蛋白基因HaFT-5、HaFT-6克隆及表达分析》

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《梭梭14-3-3蛋白基因HaFT-5、HaFT-6克隆及表达分析》

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前期根据梭梭干旱转录组测序拼接得到的18个类似14-3-3蛋白基因相关序列，挑选2个拼接出全部读码框的Unigene，并进行同源序列比对有较高相似性，推测这两个基因属于14-3-3蛋白，并命名为Ha FT-5和Ha FT-6。根据这两个序列设计两对特异性引物（表1），以梭梭c DNA为模版，进行PCR反应。其反应体系为Buffer（Mg2+）2.5μL、d NTPS 1.0μL、上下游引物各1.0μL、c DNA模板1.0μL、Taq酶0.5μL、最后加入超纯水至总体积为25μL，PCR程序如下:94℃300 s；94℃30 s，58℃30 s，72℃90 s，这3步反应30个循环；72℃600 s，4℃保存。待反应结束后，用1.5%的琼脂糖凝胶检测PCR产物，回收验证完产物后，将回收产物与Peasy-T1载体（全式金公司）连接，转入DH5α中，验证其中阳性克隆送上海生工测序。