《表1 PCR引物序列：巴西橡胶树HbGRF基因的克隆、物理定位及表达分析》

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《巴西橡胶树HbGRF基因的克隆、物理定位及表达分析》

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根据GRF家族基因的保守序列，在橡胶树基因组数据库（http://hevea.catas.cn）中做同源序列搜索，通过C D S编码区预测和序列拼接得到橡胶树Hb GRF1、Hb GRF2、Hb GRF3基因的c DNA序列。运用Primer Primer 5.0软件进行引物设计（表1）。用反转录得到的橡胶树雌花c DNA为模板，对橡胶树Hb GRF基因家族的Hb GRF1、Hb GRF2和Hb GRF3 3个成员的编码区进行扩增，PCR反应体系为20μL，其中包括Prime STAR Max Premix(2×）10μL，c DNA模板1μL，上、下游引物各0.4μL，灭菌的dd H2O 8.2μL。PCR扩增程序为：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸90 s，共扩增35个循环；最后于72℃延伸10 min。使用OMEGA公司的凝胶回收试剂盒对产物进行回收纯化后与p MD19-T载体进行连接，转化至大肠杆菌DH5α中，挑选阳性克隆重组子交华大基因公司测序。