《表3 引物序列：杨树PeHAM1和PeHAM2基因的克隆、表达及亚细胞定位》

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《杨树PeHAM1和PeHAM2基因的克隆、表达及亚细胞定位》

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以‘南林895’杨组培苗1～4周的根以及第4周的茎和叶为材料，根据克隆获得的cDNA序列设计定量引物（表3），分别以18S和Eflα为内参基因（Xu et al.，2011），采用半定量PCR和荧光定量PCR对PeHAM1和PeHAM2进行表达分析。半定量PCR反应体系同上。反应程序:94℃3 min；94℃30 s，56℃30 s，72℃30 s，25个循环；72℃1 min。荧光定量PCR反应体系:SYBR Premix Ex TaqTM（2×）10μL，PCR正向引物（10μmol/L）0.4μL，PCR反向引物（10μmol/L）0.4μL，ROX Reference DyeⅡ（50×）0.4μL，DNA模板2μL，加灭菌超纯水补至20.0μL；反应程序:94℃30 s；94℃5 s，60℃34 s，95℃15 s，40个循环；60℃1 min；95℃15 s。反应在ABI 7500 Real time PCR Systems（Applied Biosystems）上完成，每个样品设3次技术重复，采用2-△△Ct法进行相对定量的分析。