《表1 引物设计：油茶CoFAD2-1基因的克隆、亚细胞定位及组织表达》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《油茶CoFAD2-1基因的克隆、亚细胞定位及组织表达》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

通过GenBank数据库中得到的油茶FAD2基因编码区序列结合GATEWAY系统运用DNAMAN6.0软件设计特异引物及实时荧光定量PCR引物QFAD2-Fw，QFAD2-Rv，并递交上海生物工程技术有限公司合成，引物设计见表1。PCR扩增反应条件如下，采用50μL体系：cDNA 1μL，10×Pfu Buffer 5μL，引物pD207 FAD2-1 F（10μM）1μL，引物pD207FAD2-1 R（10μM）1μL，dNTP Mixture（2.5 mM）4μL，pfu DNA Polymerase（2.5 U/μL）0.2μL，ddH2O加至50μL。94℃预变性3 min，94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸2 min30 s，共30个循环，之后72℃再延伸5 min，4℃保存。扩增后产物经1%的琼脂糖凝胶电泳检测。实时荧光定量PCR仪器为LightCycler誖Nano，扩增试剂为2×TransStart誖Tip Green qPCR SuperMix，采用荧光染料SYBR Green I，参考油茶EF1α基因作为内参基因[17]。实时荧光定量PCR的反应体系见表2。根据目的基因和内参基因PCR扩增的Ct值，采用2-△△Ct法[18]计算目的基因的相对表达量。