《表1 引物信息:油茶ABI5基因的克隆及其表达分析》

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《油茶ABI5基因的克隆及其表达分析》


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根据油茶雌蕊转录组数据分析,得到长度为795 bp的ABI5基因片段,通过NCBI Blastx网站上对CoABI5的基因片段进行检索和分析,发现CoABI5蛋白与茶树ABI5相似性达到97.73%,因此推测ABI5基因片段为油茶的全长序列。利用Primer Premier 5.0软件设计一对全长引物CoABI5-F和CoABI5-R(表1)。以自交48 h子房总RNA逆转录得到的cDNA为模板,用Takara公司PrimeSTAR HS DNA Polymerase高保真DNA聚合酶进行PCR扩增,反应体系和扩增程序详见说明书。回收全长c DNA扩增片段,与载体5'minTM TA/Blunt进行连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑选阳性克隆样品送去擎科生物公司进行测序。