《表1 引物信息:飞蝗发育相关基因Omb的克隆、原核表达及时空表达分析》

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《飞蝗发育相关基因Omb的克隆、原核表达及时空表达分析》


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根据飞蝗Omb基因序列设计定量引物(表1),用β-actin基因作为内参,qPCR检测飞蝗Omb基因在不同发育时期(飞蝗1-9日龄胚胎、1-5龄若虫和雌雄成虫)和成虫不同组织(足、胸部、翅和腹部)中相对表达量变化,反应体系(10μL):cDNA1μL,SYBR Premix Ex TaqTMⅡ5μL,上下游引物(10μmol/L)各0.5μL,超纯水3μL,混匀,离心,放入荧光定量PCR仪中进行扩增。反应条件:95℃10 min;95℃15 s,53℃1 min,40个循环。每个样本设3个生物学重复,采用2-ΔΔCt法进行数据处理。采用SPSS 20.0软件中的ANOVA法进行单因素和双因素方差分析,并选用多重比较进行显著性差异分析,其中P<0.05表示样本间存在显著差异,P<0.01表示样本间存在极显著差异。