《表1 白背飞虱两个P450基因克隆与表达分析相关的引物信息》

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《白背飞虱两个P450基因的克隆、序列分析及杀虫剂胁迫下的表达分析》

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在实验室前期转录组数据的注释结果中找到P450基因的部分片段[5]，再以此片段为模板搜索白背飞虱全基因组数据[17]，找到相应的基因，并通过NCBI网站上的Blast工具进行比对，初步确认搜索到的基因为P450基因。利用Primer Premier 6.0软件设计基因特异性引物（表1）。PCR扩增条件：95℃预变性3 min；95℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1～3 min，共30个循环；最后72℃延伸10 min，4℃保存。PCR产物经电泳检测合格后，将扩增产物纯化后连接到载体上做克隆，将克隆后的产物继续扩大培养送往测序公司进行测序，测序结果利用Blastx进行相似性比对。