《表1 引物信息:毛竹PeNAC047基因的克隆与表达分析》
小写字母:分别代表包括保护碱基在内的限制性内切酶作用序列(亚细胞定位载体构建引物)和载体重组序列(转录活性检测引物);PeNAC047:毛竹NAC基因;BD:结合结构域;下同
根据测序结果,设计GFP-PeNAC047-1-F/R和GFP-PeNAC047-2-F/R引物(表1)。上游引物中加入SacⅠ内切酶位点,下游引物中加入SalⅠ内切酶位点,扩增所得PCR回收产物连接pMD18-T后测序。利用双酶切法构建pC1300::PeNAC047-1/2-GFP重组载体并转化GV3101农杆菌(Agrobacteri-um)。分别制备烟草(Nicotiana tabacum)侵染液,用拇指按压将侵染液从烟草下表皮注射到烟草叶片内(勿使用子叶),注射后2~5 d,使用激光共聚焦显微镜扫描拍摄烟草叶表皮细胞中GFP的表达情况(Yang et al.,2000)。本实验所用核Marker基因为OsART1(Tsutsui et al.,2011)。本实验所用pC1300-GFP载体为改造载体(在pC1300载体多克隆位点后加入GFP标签),获赠于浙江农林大学郑炳松教授课题组。
图表编号 | XD00121703100 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.01.25 |
作者 | 赵钟毓、侯丹、胡秋涛、魏涵天、郑颖、林新春 |
绘制单位 | 浙江农林大学省部共建亚热带森林培育国家重点实验室、浙江农林大学省部共建亚热带森林培育国家重点实验室、浙江农林大学省部共建亚热带森林培育国家重点实验室、浙江农林大学省部共建亚热带森林培育国家重点实验室、浙江农林大学省部共建亚热带森林培育国家重点实验室、浙江农林大学省部共建亚热带森林培育国家重点实验室、浙江省竹资源与高效利用协同创新中心 |
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