《表1 引物信息：珠美海棠MzDREB2A基因的克隆与表达分析》

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《珠美海棠MzDREB2A基因的克隆与表达分析》

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以珠美海棠叶片总RNA为模板，利用反转录试剂盒PrimeScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit（宝生物，大连）制备cDNA。将不同物种DREB2（2-1）序列进行比对分析，利用Primer Premier 5.0设计引物JB-F和JB-R（表1），克隆MzDREB2A基因的保守片段。PCR产物以1%琼脂糖凝胶电泳检测，经胶回收并连接至克隆载体pEASY-Blunt Simple Cloning Vector（全式金，北京）。选取阳性克隆，送往生工北京测序部进行测序。PCR反应体系:PrimeSTAR Max Premix DNA聚合酶12.5μL，上下游引物（10μmol/L）JB-F和JB-R各1μL，cDNA模板2μL，ddH2O 8.5μL。PCR反应程序:98℃预变性2 min；98℃10 s，55℃30 s，72℃90 s，30个循环；72℃5 min，4℃保存。