《表1 引物信息表:谷子抗病相关基因SiRAR1的克隆及表达分析》

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《谷子抗病相关基因SiRAR1的克隆及表达分析》


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RAR1:Mla12介导的抗性所需基因;下划线:KpnⅠ和HindⅢ酶切位点序列;斜体:保护碱基

利用Phytozome植物基因组网站(https://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html)下载的谷子'豫谷1号'参考基因组(Setaria italica v2.2),获得SiRAR1(Seita.1G182100)的全长编码序列(coding sequence,CDS),利用Primer Premier 5.0设计特异性引物SiR-AR1_K/SiRAR1_H(表1),由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以谷锈菌强毒性小种A57处理后的'十里香'叶片cDNA为模板,用2×Es Taq Master Mix(北京康为世纪生物科技有限公司)进行PCR扩增。50μL PCR反应体系:2×Es Taq Master Mix 25μL、模板DNA 3.0μL、10μmol/L上、下游引物各2μL、灭菌ddH2O 18μL。PCR扩增程序:94℃预变性2 min;94℃变性30 s,56℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环反应;最后72℃再延伸5min。