《表1 引物信息：向日葵MADS-box家族基因HaTrans6的克隆及表达分析》

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《向日葵MADS-box家族基因HaTrans6的克隆及表达分析》

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根据向日葵全发育时期454表达谱和向日葵花发育时期转录组数据（本实验室构建）筛选获得MADS-box候选基因序列，该序列与向日葵基因组数据库（https://sunflowergenome.org）中编号为Ha4＿00023988的基因序列一致；经Blast比对分析，发现Ha4＿00023988序列与预测基因HaTrans6（GenBank No.XM＿022141206.1）序列基本一致，因此将该候选基因命名为HaTrans6。根据该基因序列设计特异性引物Trans6-F/R（表1），以cDNA为模板进行PCR，扩增Trans6完整CDS序列。PCR扩增体系（50μL）为：10 ng/μL cDNA模板3μL，5×TransStart Fast Pfu Fly Buffer 10μL，2.5 mmol/L dNTPs 4μL，10μmol/L上下游引物各2μL，ddH2O 28μL，TransStart Fast Pfu Fly DNA聚合酶1μL。PCR反应程序为：98℃3 min；98℃30 s，56℃30 s，72℃1min，34个循环；72℃延伸5 min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳后进行切胶回收。将回收产物连接到克隆载体pEASY?-Blunt vector，并转入E.coli DH5α感受态细胞。在含100 mg/L Kan的LB固体培养基中恒温（37℃）倒置培养过夜；筛选阳性转化子，交送擎科生物有限公司（成都）测序。