《表1 特异性引物信息：高粱LEA基因家族的鉴定及表达分析》

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《高粱LEA基因家族的鉴定及表达分析》

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使用EASYspin植物RNA快速提取试剂盒（Aidlab，Beijing，China，RN09）提取高粱叶片总RNA，并用不含RNase的DNas‐I处理以除去基因组DNA。使用重组M‐MLV逆转录酶（Takara，Da‐lian，China）从2 mg总RNA合成第一链cDNA。使用CFX96 Thermo‐cycler (BIO‐RAD，USA）在光学96孔板中进行实时荧光定量PCR (qRT‐PCR）。反应在含有5μL稀释的cDNA，200 nM基因特异性引物和10μL SYBRGreen Master Mix (Takara，Da‐lian，China）的20μL体积中进行，条件如下：95℃10 min，95℃15 s，55°C 30 s，共40个循环。通过溶解曲线分析验证每个引物对的特异性。基因特异性引物委托生工生物（上海）股份有限公司合成，选取7个SbLEA基因进行qRT‐PCR分析。高粱肌动蛋白基因的表达水平用作内参。使用定量方法（2‐ΔΔCt）并且从三个生物学重复中估计表达的变化。用于SbLEA基因的qRT‐PCR分析的引物对见表1。