《表1 引物序列:茶树SRO基因家族的鉴定及表达分析》

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《茶树SRO基因家族的鉴定及表达分析》


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从茶树基因组数据库下载茶树SRO家族基因的基因序列,并通过Primer3plus在线网站(http://www.bioinformatics.nl/cgi-bin/primer3plus/primer3plus.cgi)进行引物设计(表1)。选用CsGAPDH(登录号GE651107)作为内参基因。按多糖多酚植物总RNA提取试剂盒[天根生化科技(北京)有限公司]的使用说明提取上述处理的总RNA,测定RNA的浓度,电泳检测完整性,然后使用Easyscript One-step gDNA Removal and cDNA synthesis superMix试剂盒(北京全式金生物技术有限公司)合成cDNA用于实时荧光定量PCR。利用伯乐生命医学产品(上海)有限公司的CFX96 Touch荧光定量PCR仪进行qRT-PCR反应:94℃30 s;94℃5 s,60℃30 s,40个循环,反应体系使用Transstart?Tip Green qPCR superMix试剂盒(北京全式金生物技术有限公司)的方法。每个样品均设置3次技术重复,反应结束后分析荧光值变化曲线及熔解曲线。用2-(35)(35) CT算法计算基因相对表达水平[30],prism 5软件制作柱状图,SPSS 17.0对数据显著性进行分析。