《表1 引物序列:苦荞ARF基因家族的鉴定及生长素诱导下的表达模式》

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《苦荞ARF基因家族的鉴定及生长素诱导下的表达模式》


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田间调查100份苦荞资源的株高与主茎节数,筛选2017—2019年株高较稳定资源4份(高秆2份:ZNQ189与PI673849,矮秆2份:PI658429与PI647612),于MS固体培养基培养7 d后,取3株长势一致的无菌苗于液体MS培养基中,室温震荡(120 r/min)1 d后,加入0.5 mg·L-1 IAA(IAA溶于二甲基亚砜(DMSO)中),于不同时间(0、0.5、1、6、12、24和48 h)对下胚轴取样,对照组添加同体积的二甲基亚砜。取50—100 mg样品加液氮充分研磨后,利用多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(天根生化科技北京有限公司)提取上述样品的RNA,使用Hi Script?III 1st Strand c DNA Synthesis Kit(+g DNA wiper)试剂盒(南京诺唯赞生物技术有限公司)进行反转录获得c DNA第一链,保存于-20℃备用。以Ft His为内参基因,同时设计Ft ARFs基因特异引物(表1),以上述c DNA为模板,使用南京诺唯赞生物技术有限公司试剂盒进行q RT-PCR检测,设置生物学重复3次,使用2-ΔΔCt法计算基因的相对表达量。