《表1 引物序列:茶树CsCCD1和CsCCD4基因的克隆和表达分析》

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《茶树CsCCD1和CsCCD4基因的克隆和表达分析》


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CsCCD1和CsCCD4基因序列从转录组数据[25]得到,在ORF两端设计引物(表1)进行RT-PCR,参照TransTaqDNA Polymerase High Fidelty(HiFi)试剂盒进行。PCR反应条件为:94℃预变性5min,94℃变性30s,56℃退火30s,72℃反应2min,72℃延伸10min,35个循环。采用1%琼脂糖凝胶电泳验证,PCR产物按照天根通用型DNA纯化回收试剂盒回收。新鲜胶回收产物立即连接到pEASY-Blunt Zera Cloning载体,转入Trans1-T1感受态细胞在氨苄青霉素固体LB培养基37℃培养过夜,挑选3个阳性克隆菌液送至北京华大基因科技有限公司测序。