《表1 实验所用引物序列》

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《文心兰乙烯不敏感基因EIN2的克隆及表达分析》

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从拟南芥基因组数据库网站（http://www.arabidopsis.org/）中下载基因AtEIN2的核酸序列作为参考序列，与‘南茜'转录组数据库进行比对分析，获得一条相似度较高的cDNA序列。根据此cDNA序列设计引物（表1）OnEIN2-ORF1-F、OnEIN2-ORF1-R、OnEIN2-ORF2-F、OnEIN2-ORF2-R、OnEIN2-OR-F、OnEIN2-ORF3-R，以文心兰‘南茜'的cDNA为模板进行PCR反应，扩增该基因的ORF序列。然后根据已知的ORF序列，分别设计2条3′-RACE的特异性引物和5′-RACE的特异性引物，结合GeneRacer TM3′和3′巢式引物以及5′和5′巢式引物，以‘南茜'文心兰的cDNA为模板进行巢式PCR反应，分别扩增3′和5′序列，用DNA-MAN对所获得的片段进行全长拼接。以上引物均由福州尚亚生物技术有限公司合成。