《表1 实验所用引物及序列》

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《施氏鲟下丘脑神经肽基因的克隆、序列分析及表达特征》

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根据施氏鲟转录组数据库序列设计引物，引物由吉林库美生物技术公司合成（表1）。采用2×Es Taq MasterMix（CWBIO）进行PCR扩增。反应程序为:94℃3 min，94℃30 s，60℃30 s，72℃2 min，35个循环；终延伸72℃2 min。1.2%琼脂糖凝胶电泳进行产物检测，使用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（CWBIO）对目的片段进行切胶回收，纯化片段连接到pMD18-T（TaKaRa）载体，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，在含Amp的LB平板上37℃培养过夜，经菌落PCR鉴定，选阳性克隆送吉林库美生物科技有限公司测序。根据已经获得的中间片段分别设计5′RACE和3′RACE的特异性引物（表1）。按照SMARTer?RACE 5′/3′Kit（TaKaRa，clontech）试剂盒的说明书进行两轮PCR扩增。胶回收、连接、转化及测序。