《表1 实验所用引物及序列》

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《施氏鲟促性腺激素α亚基的克隆、序列分析及表达调控》

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采用同源克隆的方法，根据NCBI已报道的中华鲟Acipenser sinensis Gt Hα全长序列（登录号为EU656137.1）的保守区域内设计核心引物。引物由吉林库美生物技术公司合成（表1）。以施氏鲟性腺组织的c DNA为模板，采用Ex Taq Version 2.0 plus dye(Ta Ka Ra）进行PCR扩增。反应程序为：98℃10s，60℃30 s，72℃1 min，35个循环，1.2%琼脂糖凝胶电泳进行PCR产物检测（110V，25min）。用DNA琼脂糖凝胶纯化试剂盒（CWBIO）回收目的片段切胶，纯化片段连接到p MD18-T(Ta Ka Ra）载体，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，涂布于含Amp的LB平板上37℃培养过夜。经菌落PCR鉴定后挑选阳性克隆送吉林库美生物科技有限公司测序。根据已经获得的核心片段设计5'RACE和3'RACE的特异性引物（表1）。以RACE c DNA第一链为模板，用引物UPM和Gt Hα外侧引物进行第一轮扩增，随后以第一轮PCR产物的稀释液为模板，用NUP和Gt Hα内侧引物进行第二轮扩增，按照SMARTer RACE 5'/3'Kit(Ta Ka Ra，clontech）试剂盒的说明书进行操作，胶回收、连接、转化及测序步骤同上。