《表1 实验所用引物序列:青蒿MYB类转录因子AaBPF1的克隆及功能研究》

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《青蒿MYB类转录因子AaBPF1的克隆及功能研究》


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注:下划线为Bam HⅠ和SpeⅠ的酶切位点。

根据转录组数据库中AaBPF1拼接序列设计基因特异性引物(引物序列见表1),用KOD plus DNA聚合酶进行扩增。PCR反应体系:cDNA模板1μL,AaBPF1-F 1.5μL,AaBPF1-R 1.5μL,dNTPs 5μL,MgCl22.5μL,10×KOD Plus Buffer 5μL,ddH2O补至50μL。反应程序:94℃10 min;94℃20 s,55℃20 s,68℃2 min,共40个循环;68℃10 min。取PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳分析,利用Axygen胶回收试剂盒回收目的片段,并与p JET载体连接,转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,将阳性菌液交至铂尚生物技术(上海)有限公司测序。