《表1 引物信息：血橙果肉MYB转录因子的克隆与表达分析》

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《血橙果肉MYB转录因子的克隆与表达分析》

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PAL：苯丙氨酸氨基裂解酶；CHS：查尔酮合成酶；GST：谷胱甘肽巯基转移酶；EF：延长因子；RT-PCR：反转录PCR；qPCR：实时荧光定量PCR；下同

使用RNA提取试剂盒（华越洋，北京）提取血橙果肉总RNA，利用反转录试剂盒（Ta Ka Ra，大连）合成c DNA第一链；以'摩洛'血橙中MYB转录因子Ruby （Butelli et al.，2012）为参考序列，使用DNA-Man 9软件设计特异性引物（表1，成都擎科梓熙生物技术有限公司合成），扩增'早红血橙'中同源基因的全长编码序列。同时，从'早红血橙'叶片基因组DNA中扩增MYB基因组核酸序列。使用高保真酶Prime STAR Max DNA Polymerase （Ta Ka Ra，大连）进行PCR扩增，扩增体系及条件参考高保真酶使用说明。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳后，使用胶回收试剂盒（Omega，美国）回收目的条带。回收产物连接PMD19-T载体（Ta Ka Ra，大连）并进行测序。