《表1 实验所用引物：陆地棉胆色素原脱氨酶基因的克隆及表达分析》

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《陆地棉胆色素原脱氨酶基因的克隆及表达分析》

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根据玉米（Zea mays） Zm PBGD基因（Gen Bank No.ACF87707）检索cotton FDB （https://cottonfgd.org/）中的陆地棉基因组数据库，以获得同Zm PBGD序列相似的Gh PBGD家族基因。使用一步法多糖多酚植物基因组DNA抽提试剂盒（北京诺贝莱生物科技公司）提取DNA。根据DNA序列，采用Primer Premier 5.0软件设计克隆引物（表1），并交由北京六合华大基因科技股份有限公司合成。以'鲁棉418'正常叶和花斑叶植株的叶片、花、苞叶和铃的DNA为模板，使用高保真A8酶（北京艾德莱生物科技有限公司）克隆全长基因。PCR反应体系（25μL）:DNA模板1.0μL，A8酶12.5μL，上下游引物（10 pmol/L）各0.5μL，dd H2O 10.5μL；PCR扩增条件：95℃预变性3 min；95℃变性10 s，58℃退火30 s，72℃延伸60 s，30个循环；72℃终延伸5 min。PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测和纯化回收，然后使用Zero Background p TOPO-Blunt Cloning Kit （艾德莱，北京）连接至克隆载体；将重组质粒转化大肠杆菌（Escherichia coli）感受态细胞DH5α，挑取阳性克隆进行质粒提取，然后交由北京擎科新业生物技术有限公司测序。以测序成功的4个基因序列进行生物信息学相关分析。