《表1 大刺鳅LH基因克隆及表达分析所用的引物》

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《大刺鳅促黄体生成素基因克隆及其组织表达分析》

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采用实时荧光定量PCR对大刺鳅LH基因在不同组织及不同性腺发育期的表达情况进行检测分析。按照HiScript?II Q RT SuperMix for qPCR(R223-01，南京诺维赞生物科技有限公司）说明反转录合成cDNA。以β-actin基因为内参基因、LHQF1和LHQR1为扩增引物（表1），采用ChamQTMSYBR?qPCR Master Mix(Q311-02，南京诺维赞生物科技有限公司）试剂盒在LightCycler 480荧光定量PCR仪上进行操作，所用样品设3个重复。使用2-ΔΔCt法换算目的基因的相对表达量（Livak and Schmittgen，2001），并以SPSS 19.0进行单因素方差分析（One-way ANOVA）和Duncan’s多重比较。